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General description
泛素（Ub）最初生产形式为229-a.a.聚泛素-B（UniProt P0CG47）前体蛋白，由人的UBB基因（基因ID 7314）编码或685-a.a.聚泛素C前体蛋白（UniProt P0CG48）由人的UBC基因（基因ID 7316）编码。翻译后去除聚泛素B（Cys229）和聚泛素C（Val685）的C末端，然后进行额外的翻译后裂解，以产生多个拷贝的相同的76个氨基酸的泛素（也称为高迁移率组非组蛋白蛋白HMG-20）分子（每个聚泛素B三个拷贝，每个聚泛素C九个拷贝）。通过不同的Ub Lys残基对靶蛋白进行共价修饰是细胞DNA修复，ER相关降解（ERAD），转录激活，溶酶体和蛋白酶体降解过程中有记录的事件。PINK1（PTEN诱导的假定激酶1）是一种Ser/Thr激酶，特异性地积累在去极化的线粒体中，通过Ser65处的Ub的磷酸化以及parkin N末端Ub样（UBL）域中的相应Ser残基的磷酸化，它充当parkin（Park2）E3泛素（Ub）连接酶活性的正调节剂。磷酸化的Ub以变构方式在其GINGO0结构域与磷酸化的parkin相互作用，诱导构象变化并暴露parkin RING2结构域催化半胱氨酸使具有完整的连接酶活性。基于NMR的构象研究表明，Ser65磷酸化的Ub以两种构象存在于溶液中。主要构象显示出改变的表面性质，而第二个磷酸Ub构象显示出被两个残基缩回Ub核心的C末端尾巴。Ub Ser65磷酸化对E1介导的E2充电几乎没有效应，并且主要影响E2酶的放电以形成聚Ub链。此外，大多数去泛素化酶（DUB），包括USP8，USP15和USP30，显示出对Lys63连接的聚磷酸Ub的活性受损。
观察值~17/8和~45-250 kDa。计算值8.565/17.112/25.66/34.21 kDa（单/双/三/四泛素）。〜45-250 kDa的条带代表含有ser65磷酸化Ub的泛素化蛋白。在某些裂解物中可以观察到未鉴定的条带。
Immunogen
对应于含有磷酸化Ser65的泛素靶区域序列的KLH偶联的线性肽。
Application
使用经验证可用于免疫细胞化学和蛋白质印迹的该兔多克隆抗磷酸泛素（Ser65），目录号ABS1513-I检测泛素Ser65磷酸化。
免疫细胞化学分析：代表性批次的1：500稀释液在表达PINK1的HeLa细胞中检测到CCCP（目录号215911）处理诱导的泛素Ser65磷酸化。
蛋白质印迹分析：代表性批次的1：5,000稀释液检测到GST-PINK1催化的重组泛素的Ser65磷酸化。
免疫细胞化学分析：代表性批次的1：200稀释液在没有和有CCCP处理的表达PINK1的HeLa细胞中检测到磷酸泛素（Ser65）。（由Dr. Noriyuki Matsuda提供）
Biochem/physiol Actions
基于100%的序列同源性，预期可与广泛的物种反应。
该多克隆抗体仅可检测Ser65磷酸化泛素（Ub）和含有Ser65磷酸化泛素的泛素化蛋白（包括oligoUb和polyUb）。在没有Ub Ser65磷酸化的情况下，对Ub或泛素化蛋白没有反应性。
Analysis Note
已通过蛋白质印迹法在表达PINK1的HeLa细胞中进行了评估。
蛋白质印迹分析：该抗体的1：1,000稀释液在CCCP（目录号215911）处理后，在表达PINK1的HeLa细胞的10 µg裂解物中检测到细胞泛素Ser65磷酸化诱导。
Other Notes
2024年CiteAb奖——成功的帕金森研究供应商(2024 CiteAb Award Winner for Supplier Succeeding in Parkinson′s Research)
替代品：ABS1513
| biological source | rabbit |
| Quality Level | 100 |
| antibody form | affinity isolated antibody |
| antibody product type | primary antibodies |
| clone | polyclonal |
| purified by | affinity chromatography |
| species reactivity | human |
| species reactivity (predicted by homology) | mouse (based on 100% sequence homology), guinea pig (based on 100% sequence homology), rat (based on 100% sequence homology), horse (based on 100% sequence homology), sheep (based on 100% sequence homology), bovine (based on 100% sequence homology), hamster (based on 100% sequence homology), nonhuman primates (based on 100% sequence homology) |
| technique(s) | immunocytochemistry: suitable,western blot: suitable |
| NCBI accession no. | NP_061828,NP_066289 |
| UniProt accession no. | P0CG47 |
| shipped in | ambient |
| target post-translational modification | phosphorylation (pSer65) |
| Gene Information | human ... UBB(7314) |
| 长度(mm) | |
| 宽度(mm) | |
| 高度(mm) | |
| 重量(kg) |
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