ChIPAb+乙酰组蛋白H4(Lys5)- ChIP验证抗体和引物试剂套装,兔单克隆,25ASSAYS,17-10045,Sigma

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品牌型号 : Sigma 17-10045
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产品介绍 Product Description

General description

~11 kDa
对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物(通过qPCR对每个批次进行检测),以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列,使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体,以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+乙酰组蛋白H4(Lys5)套装包含乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体、阴性对照上清、qPCR引物(用于扩增人GAPDH的166bp区)。乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体和阴性对照的规格与ChIP反应次数成比例,可用于功能性验证乙酰组蛋白H4(Lys5)相关染色质的免疫沉淀。

组蛋白H4是参与真核细胞染色质结构的5种主要组蛋白之一。H4具有一个主要的球状结构域和一个长N末端的尾巴,其与核糖体核小体′串珠′结构体的结构有关。组蛋白H4的乙酰化发生在组蛋白尾部的几个不同的赖氨酸位置,并由称为组蛋白乙酰基转移酶(HATs)的酶家族完成。


Immunogen

对应组蛋白H4[GRG-AcK-GGK]序列的多肽,其中Lys5位点乙酰化。
表位:乙酰化Lys5


Application

染色质免疫沉淀:
采用2 µL阴性对照上清液或2 µL抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体和Magna ChIP® A试剂盒(货号17-610),对未处理HeLa细胞来源、超声处理的染色质(每次IP需1 X 106细胞当量)进行染色质免疫沉淀。
采用质控引物(用于扩增人GAPDH启动子)或引物(用于扩增HeLa细胞中转录失活的人β-珠蛋白启动子),经qPCR反应鉴定乙酰组蛋白H4(Lys5)相关DNA片段,验证免疫沉淀实验成功。
数据表示为每个IP样本扩增子值相对于染色质输入(input)扩增子值的百分比(Percent Input),ChIP样本如图所示。

实验详细信息请参阅EZ-Magna ChIP A(货号17-408)或EZ-ChIP(货号17-371)试剂盒方案。

蛋白质印迹分析:
代表性批次数据。
用1:1,000稀释的抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体检测未处理或丁酸钠处理的HeLa细胞裂解液(分别为泳道1和2)。
用山羊抗兔抗体进行蛋白显色。(见图)。

蛋白质印迹分析和肽抑制:代表性批次数据。
电泳分离丁酸钠处理HeLa细胞的酸提取物,转印至PVDF膜,用1:1000稀释的抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体检测。
为了验证抗体的特异性,用修饰的组蛋白H4肽预孵育血清:

泳道1:无多肽
泳道2:乙酰组蛋白H4(K5)(货号12-343)
泳道3:乙酰组蛋白H4(K8)(货号12-344)
泳道4:乙酰组蛋白H4(K12)(货号12-345)
泳道5:乙酰组蛋白H4(K16)(货号12-346)
泳道6:乙酰组蛋白H4(K5, 8, 12, 16)(货号12-353)
泳道7:组蛋白H4(货号12-347)

用HRP标记的驴抗兔IgG和化学发光检测系统对蛋白显色。(请参见图)。

研究子类别
组蛋白
研究类别
表观遗传学&核功能
该ChIPAb+乙酰基组蛋白H4(Lys5)-ChIP验证抗体&引物套装包含抗体&特异性对照PCR引物,使用方便。


Biochem/physiol Actions

由于序列相似性,预计具有广泛的交叉反应性。
识别Lys5位点乙酰化的组蛋白H4。


Packaging

每组25次测定。推荐用于:每次染色质免疫沉淀约2 μL抗体(取决于生物学背景)。


Physical form

抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体(兔多克隆IgG)。1瓶,50 μL兔单克隆IgG细胞培养上清液,含0.1%叠氮化钠。储存于 -20°C。

阴性对照上清液(兔):1瓶,50 μL培养物上清液,含0.05%叠氮化钠。储存在-20 °C。

对照引物。1瓶,75 μL,人GAPDH启动子特异性引物各5μM。在-20°C下储存。
对于:TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
REV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA


Preparation Note

自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议:**次融化后,在取下瓶盖之前,将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中,并储存于-20°C。避免反复冻融循环,以免损坏IgG和影响产品性能。


Analysis Note

对照
包括阴性对照上清和人GAPDH特定引物。
染色质免疫沉淀:
采用2 µL阴性对照上清液或2 µL抗乙酰组蛋白H4(Lys5)抗体和Magna ChIP® A试剂盒(货号17-610),对来自未处理HeLa细胞的超声处理的染色质(每次IP需1 X 106细胞当量)进行染色质免疫沉淀。
使用针对人GAPDH启动子的ChIP质控引物经qPCR反应鉴定乙酰组蛋白H4(Lys5)相关DNA片段,验证免疫沉淀实验成功(见图)。
有关实验详细信息,请参阅EZ-Magna ChIPA(目录号17-408)或EZ-ChIP(目录号17-371)方案。


Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany


Disclaimer

除非我们的产品目录或产品附带的其他公司文档另有说明,否则我们的产品仅供研究使用,不得用于任何其他目的,包括但不限于未经授权的商业用途、体外诊断用途、离体或体内治疗用途或任何类型的消费或应用于人类或动物。


技术参数 Specifications
biological sourcerabbit
Quality Segment100
antibody formculture supernatant
clonemonoclonal
species reactivityhuman
manufacturer/tradenameChIPAb+,Upstate®
technique(s)ChIP: suitable,immunoprecipitation (IP): suitable,western blot: suitable
isotypeIgG
NCBI accession no.NP_001029249
UniProt accession no.P62805
shipped indry ice
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高度(mm)
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