蛋白印迹封闭试剂，溶液，6X100ML，11921681001，Roche

Preparation Note

工作溶液：制备工作溶液

• Tris 缓冲液（TBS），pH 7.5

在 800 ml 双蒸水中添加 6.05g Tris 碱（50mM）和 8.76g 氯化钠（150mM），并用约 9.5 ml 1M 盐酸调节 pH 值至 7.5。然后用双蒸水稀释至 1L。在 2-8°C 下，TBS 可稳定储存 3 个月。
注意：叠氮化钠对 POD 有抑制作用，因此在使用 POD 复合物时，不得将叠氮化钠用作抗菌剂。

• TBS-Tween（TBST）

洗涤缓冲液 1：将 1 ml Tween 20 溶于 1L TBS 中。在 2-8°C 下，TBST 可稳定储存 3 个月。
注意：0.1％ Tween 20 适用于大多数应用，但具体取决于所用的膜和抗体 - 不同的表面活性剂（如SDS、Triton X-100 和 Nonidet P40），以及表面活性剂浓度在 0.01 至 1％ 之间可以产生更好的结果。

• 封闭液（1％）

使用 90ml TBS 稀释 10ml Western 封闭液（10x 浓缩液）。在 2-8°C 下，封闭液可储存 1 个月。
注意：叠氮化钠对 POD 有抑制作用，因此在使用 POD 复合物时，不得将叠氮化钠用作抗菌剂。

• 封闭液（0.5％）

使用 50ml TBS 溶液稀释 50ml 封闭液（1％）。

• 抗体溶液

所有抗体的稀释液和孵育液是封闭液（0.5％）（用 TBS 溶液稀释）（见上文）。为了让检测效果达到**状态，我们建议在进行蛋白质印迹实验之前，先优化一抗和二抗的稀释浓度。（首先使用稀释 3 至 4 倍的一抗和恒定浓度的二抗。然后选择最合适的一抗稀释液，并以相同的方式优化二抗浓度。）
注意：封闭液的浓度是改善蛋白质印迹信噪比的重要参数。如果优化了抗体浓度之后，背景仍然较高，则在抗体孵育和洗涤步骤期间将封闭液的浓度从 0.5％ 增加至 1％。如果即便延长了抗体孵育时间，信号仍然较弱，则在抗体孵育和洗涤步骤期间将封闭液的浓度也从 0.5％ 降低至 0.1％。