新冠相关细胞免疫protocol

COVID-19恢复期供者采集血液，提取其PBMC，并使用活细胞染料CFSE标记。分别加入SARS-CoV-2相关纤突蛋白（S蛋白），膜蛋白（M蛋白），核蛋白（N蛋白）及其三者混合蛋白（Mix）与PBMC共培养，Day5掺入³H胸腺嘧啶，进行为期6天的培养扩增。借助³H胸腺嘧啶核苷掺入检查法，来评估SARS-CoV-2相关蛋白对PBMC的增殖效应，结果如下：

³H胸腺嘧啶核苷掺入检查法检测，S,M,N多肽可以刺激PBMC扩增，且三者混合后对细胞的扩增效应更明显。

随后使用流式细胞仪检测刺激后PBMC中，其CD4+/CD8+ T细胞的变化情况。可以发现，混合多肽刺激后，CD3+ T细胞占比明显升高，且CD4/CD8 比例有明显变化。

为了进一步了解PBMC经过相关多肽刺激后，其细胞是如何应答的？免疫细胞的功能是否发生了改变？带着这些问题，研究者们使用IsoPlexis单细胞功能蛋白组检测系统对PBMC细胞功能进行了评估。方法如下：

SARS-CoV-2混合多肽刺激PBMC后，不论是CD4+ T还是CD8+ T细胞，其免疫应答均显著增强，多功能指数PSI升高至原来的近2倍。进一步挖掘数据，CD8+ T细胞的免疫响应集中在效应因子和趋化因子，如MIP-1α，TNF-α，IFN-γ，Granzyme B，MIP-1β；CD4+ T细胞则主要有效应因子和刺激因子在起主要作用，如IL-2，GM-CSF，TNF-α，IFN-γ（具体因子分泌谱见下图PCA主成分分析结果）。

IsoPlexis单细胞功能蛋白评估系统，是在单细胞层面评估SARS-CoV-2相关多肽对T细胞的特异性免疫反应强有力的工具。研究者接下来希望借助该平台相关结果，结合自身器官移植研究方向，进行多方面的拓展研究。如评估器官移植与非器官移植病人在感染COVID-19前后，其不同的细胞免疫反应；通过PSI变化探索免疫抑制剂，如TAC，SRL，EVR，MMF对T细胞功能的影响；根据PSI变化评估器官移植患者免疫状态，以此来预测免疫排斥反应。