TMB/E超灵敏蓝色辣根过氧化物酶底物（可溶性），100ML，ES022-100ML，密理博

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品牌型号：密理博 ES022-100ML

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胰蛋白胨，500g，LP0042B，Oxoid

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产品介绍 Product Description

General description

TMB（3，3′，5，5′-四甲基联苯胺）已被证明是HRP测定的安全敏感底物。最初，在HRP和过氧化氢存在下，形成单电子氧化产物。该化合物是阳离子自由基，呈蓝色，吸附**值为653 nm。与HRP/H2O2进一步反应或用酸酸化自由基会产生二亚胺末端氧化产物，该产物在450 nm处吸附光。自由基（E653nm=3.9 x 104 mol-1 cm-1）和二亚胺（E450nm=5.9 x 104 mol-1 cm-1）的消光系数为HRP和HRP标记探针的测定提供了非常灵敏的系统。ES022是一种单组分试剂，在室温下稳定，对正常实验室光不敏感。对TMB和过氧化氢浓度进行了优化，并与通常用于免疫学分析的HRP浓度产生线性响应。

Application

方法概要：

分析物与固相结合并与HRP标记探针反应完成后，加入ES022。TMB的氧化产生蓝色反应产物，该产物在650 nm处测量。可以记录作为时间函数的颜色形成，或者在固定间隔后用氟化钠终止反应。通过添加酸将蓝色自由基转化为二亚胺，可以提高灵敏度。立即在450 nm处测量产生的黄色。

样品程序：

1. 完成全部与抗体，探针，HRP标记的试剂一起的所需培养。

2. 用含0.1%吐温-20的PBS或Tris缓冲盐水清洗平板至少4次。

3. **一次洗涤后，振摇并吸干平板孔中的全部残留缓冲液。

4. 将0.1 mL ES022（TMBE溶液）加入至适当的孔中并培养5-30分钟。

注意：反应时间将取决于HRP探针的活性。如果颜色变色太快，则零级动力学将不占优势。可能需要稀释探针，抗体或HRP标记的试剂。

5. 该反应可以作为动力学分析的时间函数进行监测，或者用0.1 mL 0.3 mol/L硫酸或0.1%氟化钠终止反应，并在450 nm下读取。

6. 如果该程序需要转化为黄色二亚胺，则加入0.1 mL上述试剂部分中所述的任何一种酸，并在5分钟内记录吸光度。

时间，试剂体积和温度的变化需要用户进行标准化。

Physical form

提供的试剂：

含有TMB，2.08 μMol L（-1）和过氧化氢的液体溶液，柠檬酸缓冲液（pH值3.3）。还含有无毒的专有稳定剂。

所需物料：终止反应所需的试剂，但未提供用于终止反应和保存蓝色色原的

0.3 Mol L硫酸。

注意：试剂级水必须含有少于10（-7）mol/L的铁或铜盐，否则未反应的TMB将非酶促转化为二亚胺。
色码：黄色