Pwo DNA 聚合酶，500UNITS，11644955001，Roche

General description

Pwo DNA聚合酶是一种高度可加工热稳定的5′3′ DNA聚合酶，并具有3′–5′ 核酸外切酶活性，又称校对活性。该酶没有可检测的 5′–3′ 外切酶活性。Pwo DNA 聚合酶表现出更强的热稳定性，且在+100 °C的半衰期超过两小时，与此相比Taq 聚合酶′在此温度下的半衰期不到 5 分钟。Pwo DNA 聚合酶产生的 PCR 产物是平末端的，因此可以直接用于平末端连接，无需对末端进行任何预处理。
在 PCR 过程中使用 Pwo DNA 聚合酶可显着减少随机扩增错误的发生。

Application

• 由于其校对活性，耐热的 Pwo DNA 聚合酶的错误率极低，与 Taq DNA 聚合酶相比低 18 倍。因此它是 DNA 合成中需要**可能保真度的应用的理想选择。可用于高保真 PCR
• PCR 产物的克隆
• 罕见突变的表征
• PCR

Features and Benefits

• 准确度**（比 Taq DNA 聚合酶准确 18 倍）
• 高热稳定性
• 与 Taq DNA 聚合酶几乎同样的进程
• 接受修饰的核苷酸

Packaging

1 个试剂盒包含 4 种组份

Preparation Note

打开后的容器必须小心重新密封并
保持直立以防止泄漏。
Pwo DNA 聚合酶最初是从超嗜热的古细菌——沃氏火球杆菌中分离得到的。
修饰核苷酸是底物
Pwo DNA 聚合酶接受修饰核苷酸，如地高辛-dUTP、生物素-dUTP 或荧光素-dUTP。因此，它可以在 PCR 过程中将这些核苷酸添加到 DNA 中。这些非放射性标记的产物可在许多应用中用作杂交探针。
镁浓度
如果使用随酶提供的含镁反应缓冲液，PCR 中的最终 MgCl2 浓度将为 2.0 mM。对于其他镁浓度（例如，为优化反应以适应特定模板），使用无镁反应缓冲液并加入适量镁贮备液。

Analysis Note

测定每批 Pwo DNA 聚合酶：

• 活性 ：在活化 DNA 上检测酶。
• 功能 ：酶分两次 PCR 检测，使用 λ以 DNA 和人类基因组 DNA 为模板。
• 校对能力 ：校对活动根据 laq Iq 保真度测试 [Frey,B. & Suppmann,B. (1995) 生物化学 2. 8-9]测试。
• 不存在核酸酶： 该酶在各种底物上进行检测，以确保根据当前的质量控制程序不存在可检测的核酸内切酶、核酸外切酶和切口活性。

Other Notes

一个单位 Pwo DNA 聚合酶定义为在 + 70℃ 和下述条件下 30 min 内催化 10 nmol 总脱氧核苷三磷酸掺入酸可沉淀 DNA 的酶量。

单位分析： 活化 DNA 分析用孵育缓冲液

20 mM Tris-HCl，pH 8.8 (20°C)，50 mM KCl，2.5 mM MgCl ₂ ，10 mM 2-巯基乙醇，0.2 mM 各 dATP，dCTP，dGTP，dTTP。


孵育程序

12.5 mg 活化小牛胸腺 DNA 和 0.1 mCi [α- ³² P] dCTP 与 0.01～0.1 UPwo DNA 聚合酶在 50μl 含石蜡油的孵育缓冲液，+ 70℃，30 min。通过三氯乙酸沉淀，然后闪烁计数，测定掺入的 dNTP 的量。

体积活度：5 U/μl
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

Legal Information

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