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General description
TMB（3，3′，5，5′-四甲基联苯胺）已被证明是HRP测定的安全敏感底物。最初，在HRP和过氧化氢存在下，形成单电子氧化产物。该化合物是阳离子自由基，呈蓝色，吸附**值为653 nm。与HRP/H2O2进一步反应或用酸酸化自由基会产生二亚胺末端氧化产物，该产物在450 nm处吸附光。自由基（E653nm=3.9 x 104 mol-1 cm-1）和二亚胺（E450nm=5.9 x 104 mol-1 cm-1）的消光系数为HRP和HRP标记探针的测定提供了非常灵敏的系统。ES001是一种单组分试剂，在室温下稳定，对正常实验室光不敏感。对TMB和过氧化氢浓度进行了优化，并与通常用于免疫学分析的HRP浓度产生线性响应。
Application
方法概要：
分析物与固相结合并与HRP标记探针反应完成后，加入ES001。TMB的氧化产生蓝色反应产物，该产物在650 nm处测量。可以记录作为时间函数的颜色形成，或者在固定间隔后用氟化钠终止反应。通过添加酸将蓝色自由基转化为二亚胺，可以提高灵敏度。在450 nm处立即测量产生的黄色。
样本程序
1.使用需要与抗体、探针、HRP标记试剂完成所有必需的孵育。
2.用含0.1%吐温-20的PBS或Tris缓冲盐水清洗平板至少4次。
3.**一次洗涤后，振摇并吸干平板孔中的全部残留缓冲液。
4.将0.1 mL ES001（TMBE溶液）添加至适当的孔中并孵育5-30分钟。
注意：反应时间将取决于HRP探针的活性。如果颜色变色太快，则零级动力学将不占优势。可能需要稀释探针、抗体或HRP标记试剂。
5.可以将反应作为动力学分析的时间函数进行监测，或者用0.1 mL的0.1%氟化钠终止反应，并在650 nm处读取。
6.如果程序要求转换为黄色二亚胺，则添加0.1 mL上述试剂部分所述的任一酸，并记录5分钟内的吸光度。
时间、试剂体积和温度的变化需要用户进行标准化。
Physical form
提供的试剂：
含有1.25 mmol/L TMB和2.21 mmol/L过氧化氢以及低于1%二甲基亚砜的0.08 mol/L醋酸盐缓冲液（pH值为4.9）的液体溶液。还含有无毒的专有稳定剂。
所需的物料：
终止反应所需的试剂，但未提供
A. 0.1%氟化钠，用于终止反应并保留蓝色色原。取1 g氟化钠，溶于1升试剂级水中进行制备。使用氟化钠时，请遵守标签上的全部注意事项。
B. 用于终止反应并将蓝色自由基转化为黄色二亚胺的酸。可使用0.5 mol/L硫酸或0.25 mol/L盐酸。必须在加入酸后5分钟内获得吸光度。
注意：试剂级水必须含有低于10-7 mol/L的铁或铜盐，否则未反应的TMB将非酶促地转化为二亚胺。
色码：黄色
Preparation Note
在室温下可储存最长六个月。在2-8°C下可长期储存达12个月。避免暴露在阳光直射下。如果溶液为蓝色或浑浊，则丢弃。
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
除非我们的产品目录或产品附带的其他公司文档另有说明，否则我们的产品仅供研究使用，不得用于任何其他目的，包括但不限于未经授权的商业用途、体外诊断用途、离体或体内治疗用途或任何类型的消费或应用于人类或动物。
| form | liquid |
| manufacturer/tradename | Chemicon® |
| technique(s) | ELISA: suitable |
| λmax | 450 nm |
| web metadata keyword.default | 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine substrate,TMB HRP substrate 100mL,TMB diimine oxidation product for assays,TMB peroxidase substrate blue color,TMB reagent for ELISA Millipore,TMB reagent for horseradish peroxidase,TMB reagent for immunoassays,TMB reagent for immunodetection,TMB solution for Western blotting,TMB substrate for detection of HRP activity,TMB substrate with 653 nm adsorption maximum,high purity TMB for HRP assays,lab-grade TMB for ELISA applications,soluble TMB substrate for ELISA assays |
| shipped in | wet ice |
| 长度(mm) | |
| 宽度(mm) | |
| 高度(mm) | |
| 重量(kg) |
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