六核苷酸混合物,100UL,11277081001,Roche

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品牌型号 Roche 11277081001
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产品介绍 Product Description

General description

方便的寡核苷酸混合物,用于放射性、地高辛或生物素标记的核苷酸快速随机引物标记 DNA。Klenow 聚合酶合成互补 DNA 链-作为引物的随机寡核苷酸的 OH 末端。


Application

Hexanucleotide Mix 是所有可能序列的六聚体核苷酸混合物,用于随机引物 DNA 标记。
高比活性的 DNA 标记探针用于多种杂交技术:

  • 基因文库的筛选
  • Southern 和 northern 印迹
  • 原位 杂交
  • RT-PCR
  • cDNA文库的生成
  • **链cDNA的合成
  • 载体滴度测定中
  • 第二链合成


Biochem/physiol Actions

热灭活:通过加入2μl 0.2MEDTA (pH 8.0) 和/或加热至 65°C 10 分钟来停止反应。
Feinberg 和 Vogelstein 开发的“随机引物”DNA 标记方法是基于所有可能的己核苷酸与待标记 DNA 的混合物进行杂交。所有序列组合在六核苷酸引物混合物中表示,这导致引物以统计方式与模板 DNA 结合。因此,保证沿模板 DNA 全长的标记程度相等。互补链采用 Klenow 酶,标记级,从随机六核苷酸引物的 3'-OH 末端合成。反应中存在的修饰脱氧核苷三磷酸([32P]、[35S]、[3H] 或 [125I] 地高辛或生物素标记)掺入新合成的互补 DNA 链。


Features and Benefits

本品为 10x 浓度的随机己酸核苷酸混合物。从统计学上看,混合物可能含有多达 4096 种不同的己酸核苷酸,但这些核苷酸的含量可能不同。

内容物
反应缓冲液中的环己核苷酸(62.5 A260 单位/ml)的 10x 浓缩混合物[0.5M Tris-HCl,0.1M MgCl2,1 mM 二硫赤藓糖醇 (DTE),2 mg/mL BSA,pH 7.2 (+ 20 ℃)]
注: 混合物与 DIG DNA 标记和检测试剂盒的小瓶 5 和 DIG DNA 标记试剂盒的小瓶 5 以及随机引物 DNA 标记试剂盒的小瓶 6 中提供的完全相同。


Preparation Note

检测时间
标记(放射性):50 min
地高辛-11-dUTP 标记试验:80 min

样品材料

  • DNA 片段
  • 线性化质粒 DNA
  • λDNA
注: 待标记 DNA 片段的长度不影响反应。100 bp 长度的 DNA 片段与线性化质粒或 λ 同样标记-DNA。输入的 DNA 仅用作合成标记 DNA 的模板,并且在反应期间不被降解,使得使用该方法标记极少量的 DNA (10 ng) 成为可能。

合成: 所有 4 个碱基均用于合成该随机六核苷酸混合物。在最初的反应中,起始核苷酸连接到固相载体。在随后的偶联反应中,等摩尔量的 4 dNTP 与起始核苷酸连接,直到生成六聚体。然后从固相载体中释放六聚体。
寡核苷酸经 HPLC 纯化、脱盐和 5′-磷酸化。


Analysis Note

吸收: 62.5 A260 单位相当于 2.5 mg/mL 己酸核苷酸。
在随机引物 DNA 标记试剂盒中检测的功能。


Other Notes

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。


技术参数 Specifications
formsolution
usage sufficient for 50 labeling reactions
packagingpkg of 100 μL
manufacturer/tradenameRoche
technique(s)Northern blotting: suitable,Southern blotting: suitable,cDNA synthesis: suitable (first strand),hybridization: suitable
color colorless
solubilitywater: miscible
storage temp.−20°C
长度(mm)
宽度(mm)
高度(mm)
重量(kg)
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