KAPA2G Robust PCR 试剂盒，250UNITS，KK5005，Roche

General description

经过改良的第二代 KAPA2G Robust DNA 聚合酶可以解决广泛扩增子类型（富含 GC 和AT）的不一致扩增问题。该产品具有更高的持续合成能力和比活性，可转化为强大的 PCR 性能、高灵敏度和对常见抑制剂的耐受性。KAPA2G Robust DNA 聚合酶的高性能适合于挑战性 PCR 应用和困难样本扩增，显著降低使用多种酶和扩增方案的优化难度。

Application

KAPA2G Robust PCR 试剂盒适用于：

• 扩增富含 GC 或 AT 的模板
• 含有常见 PCR 抑制剂（例如，盐、尿素、SDS 或乙醇）的模板
• 粗制样本 PCR，例如口腔拭子，培养的哺乳动物、酵母或细菌细胞
• 菌落 PCR
• 聚合酶链式反应聚合酶

Biochem/physiol Actions

KAPA2G Robust DNA 聚合酶具有 5′→3′ 聚合酶和 5′→3′ 核酸外切酶活性，但是没有3′→5′ 核酸外切酶（校正）活性。KAPA2G Robust具有类似于野生型 Taq的保真度；它的错误率为大约每结合1.7 x 105个核苷酸出现1次错误。KAPA2G Robust是一种高度持续性DNA聚合酶，能够以15秒/周期的延伸时间扩增高达1 kb的DNA片段。使用额外的延伸时间可能导致拖尾（smearing）和非特异性扩增。对于以基因组DNA为模板的1 kb<扩增子，每个周期15秒足以获得高产量的产物。对于较长的扩增子，时间可以增加到**60秒/ kb，以15秒为增量。KAPA2G Robust生成的PCR产物是3′-dA尾的，可以克隆到TA克隆载体中。

Features and Benefits

有效扩增富含 GC 和 AT 的靶标

• 强力扩增富含 GC 和 AT 的模板
• 提高 PCR 成功率

• 从粗样本中有效扩增
• 每单位酶的产率和灵敏度更高

• 在大肠杆菌和酵母细胞直接 PCR 中具有更高的产量和更好的一致性

• 带 dNTP 的 KAPA2G Robust PCR 试剂盒包含 KAPA2G Robust DNA 聚合酶，设计用于高处理能力和抑制剂耐受性。
• 纯化的基因组 DNA 和粗制样品（例如菌落 PCR）均可用作模板。
• 每 25 μL 反应使用 0.5 UKAPA2G 耐用 DNA 聚合酶。更具挑战性的 PCR（GCrich，粗品）可能需要更高的酶浓度。
• 每个循环的延伸时间设置为 15 sec/kb，对于困难扩增子或模板，增加到 30-60 sec/kb。
• 含有1.5mM MgCl₂ 的 KAPA2G 缓冲液（1X）。
• 可以使用试剂盒中提供的 25mM MgCl₂ 溶液额外添加 MgCl₂。
• KAPA2G 缓冲液 A 经过优化，具有高产量、特异性和灵敏度。
• 对于抑制剂污染的模板样品，建议使用 KAPA2G 缓冲液 B。
• KAPA2G GC 缓冲液推荐用于富含 GC 的 PCR（>70% GC）。
• KAPA 增强剂 1 可与 KAPA2G 缓冲液 A 或 B 一起使用，特别适用于富含 GC 的 PCR 试验。
• 反应产物是 3′-dA-尾，并且可以克隆到 TA 克隆载体中。

Preparation Note

在每次使用前，应确保产品已完全解冻并充分混合。短期使用时，可将试剂保存 4°C 条件下（最长 1 个月）。长期储存时，应将试剂放回 -20°C 环境中。如果所有组份在使用过程中非常仔细，没有受到污染，则试剂盒在短时间内（最多 3 天）被放置在室温下（无意中）预计不会失效。不建议在室温和 4°C 下长期储存。请注意，在 -20°C 以上的温度下储存的试剂在使用过程中受到污染时更容易降解，因此在超过 -20°C 的温度下储存的风险由用户自己承担。

Analysis Note

每批 KAPA2G 耐用 DNA 聚合酶经确认含 < 2% 污染蛋白 (Agilent protein 230 Assay)。 KAPA2G 耐用 PCR 试剂盒经过严格的质量控制测试，没有污染外源和内切酶活性，符合 DNA 污染水平的严格要求。

Other Notes

仅供研究使用。不可用于诊断过程。